小鼠原代食管上皮原代細胞

細胞培養(yang) 操作：

收貨處理取出T25細胞培養(yang) 瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細胞培養(yang) 箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態

傳(chuan) 代密度細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang)

傳(chuan) 代代數可傳(chuan) 5代左右；3代以內(nei) 狀態

傳(chuan) 代比例傳(chuan) 代建議1：2傳(chuan) 代，1:2傳(chuan) 代就是1個(ge) T25瓶傳(chuan) 2個(ge) T25瓶或者2個(ge) 6cm皿。不是1個(ge) T25瓶傳(chuan) 2個(ge) 10cm皿

傳(chuan) 代方法：

1.吸出T25細胞培養(yang) 瓶中的培養(yang) 基，用PBS清洗細胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yang) 瓶中，輕微轉動培養(yang) 瓶至消化液覆蓋整個(ge) 培養(yang) 瓶底後，吸出多餘(yu) 消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓後，再加入5ml培養(yang) 基終止消化；

3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yang) 瓶傳(chuan) 代，然後補充新鮮的培養(yang) 基至5mL，置於(yu) 37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yang) 箱中靜置培養(yang) ；

4.待細胞貼壁後，培養(yang) 觀察；之後每2-3天換液一次新鮮的培養(yang) 基。

商品屬性：

形態：鋪路石狀細胞，不規則
培養(yang) 基：小鼠食管上皮細胞wan全培養(yang) 基

培養(yang) 環境：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

傳(chuan) 代特征：可傳(chuan) 5代左右；3代以內(nei) 狀態

細胞基本屬性：

種屬來源：小鼠

組織來源：食管食管

生長特性：貼壁生長

產(chan) 品規格：5x105cells/T25或1mL凍存管
換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：

產(chan) 品貨期：5-6周左右

運輸方式：T25培養(yang) 瓶/ 順豐(feng) 快遞（包郵）

供應限製：僅(jin) 限於(yu) 科學研究，絕不可作為(wei) 動物或人類疾病的治療產(chan) 品使用

背景介紹：:小鼠食管上皮細胞采用機械分離法結合組織貼塊法，並通過上皮細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基培養(yang) 篩選製備而來，小鼠食管上皮細胞分離自食管組織；食管是咽和胃之間的消化管，食管在係統發生上起初很短，隨著頸部的伸長和心肺的下降，而逐漸增長。食管可分為(wei) 頸段、胸段和腹段。脊椎動物食管的頸段位於(yu) 氣管背後和脊柱前端，胸段位於(yu) 左、右肺之間的縱膈內(nei) ，胸段通過膈孔與(yu) 腹腔內(nei) 腹相連，腹段很短與(yu) 胃相連。在發育過程中，食管的上皮細胞增殖，由單層變為(wei) 複層，食管使管腔變狹窄，甚至一度閉鎖，以後管腔又重新出現。哺乳動物的食管結構上由內(nei) 向外分四層：黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜。其中，黏膜層，包括上皮、固有層和黏膜肌層。上皮為(wei) 較厚的未角化的複層扁平上皮，耐摩擦，有保護作用。在食管與(yu) 胃賁門交界處，複層扁平上皮突然變成單層柱狀上皮。食管被一層線性排列的、無角化、潮濕的複層扁平上皮細胞覆蓋，其頂端細胞膜和細胞間連接複合體(ti) 聯合在一起產(chan) 生有效滲透屏障，防止食管內(nei) 容物的滲入。特別的是，層屏障使表層細胞的基質外側(ce) 細胞膜和深層細胞的全部細胞膜不暴露於(yu) 食管腔內(nei) 規律的大幅波動的滲透壓之下。從(cong) 組織學上講，食管上皮由兩(liang) 層組成，基底層和分化層；其中，僅(jin) 基底層的細胞可以增殖，然後向食管腔移行。移行過程伴隨有分化的發生和分化標記的依序表達。食管上皮細胞的培養(yang) 是研究食管正常生理機製和食管癌變機製的非常好的體(ti) 外模型。

原代細胞培養(yang) 的主要步驟包括：

‌一、剝離組織，去除外膜、結締組織等‌：將組織從(cong) 動物體(ti) 中取出，並去除可能存在的外膜或結締組織等雜質。

二、‌洗滌後將組織剪成1mm左右的小塊‌：使用生理鹽水或其他適當的緩衝(chong) 液洗滌組織，然後將其剪成約1mm大小的小塊。

三、‌用0.1%～0.2%的消化‌：將剪碎的組織塊加入含有0.1%～0.2%的緩衝(chong) 液中，進行消化。消化時間可根據具體(ti) 實驗需求選擇熱消化（37℃）或冷消化（4℃），熱消化時間短，冷消化時間長但條件更溫和。

‌四、吹打分散後，過濾、計數‌：將消化後的細胞吹打到一個(ge) 離心管中，然後過濾、計數。

五、‌按30萬(wan) /毫升分瓶培養(yang) ‌：將計數後的細胞按30萬(wan) /毫升的濃度分瓶培養(yang) 。

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