小鼠原代視網膜微血管內(nei) 皮原代細胞

商品屬性：

形態：內(nei) 皮細胞樣
培養(yang) 基：小鼠視網膜微血管內(nei) 皮細胞wan全培養(yang) 基

培養(yang) 環境：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

傳(chuan) 代特征：可傳(chuan) 5代左右；3代以內(nei) 狀態

細胞基本屬性：

種屬來源：小鼠

組織來源：視網膜視網膜

生長特性：貼壁生長

產(chan) 品規格：5x105cells/T25或1mL凍存管
換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：

產(chan) 品貨期：5-6周左右

運輸方式：T25培養(yang) 瓶/ 順豐(feng) 快遞（包郵）

供應限製：僅(jin) 限於(yu) 科學研究，絕不可作為(wei) 動物或人類疾病的治療產(chan) 品使用

背景介紹：:小鼠視網膜微血管內(nei) 皮細胞采用膠原酶-中性蛋bai酶混合消化法結合密度梯度離心法、最後通過內(nei) 皮細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基培養(yang) 篩選製備而來，小鼠視網膜微血管內(nei) 皮細胞分離自視網膜組織；視網膜居於(yu) 眼球壁的內(nei) 層，是一層透明的薄膜。視網膜由色素上皮層和視網膜感覺層組成，兩(liang) 層間在病理情況下可分開，稱為(wei) 視網膜脫離。色素上皮層與(yu) 脈絡膜緊密相連，由色素上皮細胞組成，它們(men) 具有支持和營養(yang) 光感受器細胞、遮光、散熱以及再生和修複等作用。組織學上視網膜分為(wei) 10層，由外向內(nei) 分別為(wei) ：色素上皮層、視錐、視杆細胞層、外界膜、外顆粒層、外叢(cong) 狀層、內(nei) 顆粒層、內(nei) 叢(cong) 狀層、神經節細胞層、神經纖維層、內(nei) 界膜。視網膜內(nei) 層為(wei) 襯於(yu) 血管膜內(nei) 麵的一層薄膜，有感光作用；後部鼻側(ce) 有一視神經乳頭。視網膜上的感覺層是由三個(ge) 神經元組成。神經元是視細胞層，專(zhuan) 司感光，它包括錐細胞和杆細胞。視杆細胞主要在離中心凹較遠的視網膜上，而視錐細胞則在中心凹處最多。第二層叫雙節細胞，約有10到數百個(ge) 視細胞通過雙節細胞與(yu) 一個(ge) 神經節細胞相聯係，負責聯絡作用。第三層叫節細胞層，專(zhuan) 管傳(chuan) 導。視網膜是一層菲薄的但又非常複雜的結構，它貼於(yu) 眼球的後壁部，傳(chuan) 遞來自視網膜感受器衝(chong) 動的神經纖維跨越視網膜表麵，經由視神經到達出口。視網膜的分辨力是不均勻的，在黃斑區，其分辨能力。它是組成血管腔麵單層扁平上皮樣細胞，它所產(chan) 生和分泌的生物活性物質對維持血管張力、調節血壓、抗血栓形成等有重要作用，在視網膜血管疾病的發病機製中有重要病理生理學意義(yi) 。由於(yu) 從(cong) 不同的組織和器官獲得的內(nei) 皮細胞具有不同的特性，在腦和視網膜中，這些內(nei) 皮細胞具有內(nei) 屏障的功能，在調節血管生理狀態，釋放血管活性物質以及新生血管的形成中發揮著重要作用，體(ti) 外分離培養(yang) RCEC對研究視網膜血管性疾病發生發展的病理生理機製以及疾病的早期防治具有重要臨(lin) 床意義(yi) 。糖尿病性視網膜病變、年齡相關(guan) 性黃斑變性等視網膜疾病均與(yu) 視網膜血管病理性改變密切相關(guan) 。隨著對視網膜血管性疾病的研究深入，發現視網膜血管內(nei) 皮細胞是該病變的關(guan) 鍵細胞。通過體(ti) 外分離培養(yang) 原代視網膜微血管內(nei) 皮細胞獲得大量純度高的內(nei) 皮細胞，可為(wei) 視網膜血管性疾病研究提供可靠的體(ti) 外模型。

原代細胞培養(yang) 的主要步驟包括：

‌一、剝離組織，去除外膜、結締組織等‌：將組織從(cong) 動物體(ti) 中取出，並去除可能存在的外膜或結締組織等雜質。

二、‌洗滌後將組織剪成1mm左右的小塊‌：使用生理鹽水或其他適當的緩衝(chong) 液洗滌組織，然後將其剪成約1mm大小的小塊。

三、‌用0.1%～0.2%的消化‌：將剪碎的組織塊加入含有0.1%～0.2%的緩衝(chong) 液中，進行消化。消化時間可根據具體(ti) 實驗需求選擇熱消化（37℃）或冷消化（4℃），熱消化時間短，冷消化時間長但條件更溫和。

‌四、吹打分散後，過濾、計數‌：將消化後的細胞吹打到一個(ge) 離心管中，然後過濾、計數。

五、‌按30萬(wan) /毫升分瓶培養(yang) ‌：將計數後的細胞按30萬(wan) /毫升的濃度分瓶培養(yang) 。

細胞培養(yang) 操作：

收貨處理取出T25細胞培養(yang) 瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細胞培養(yang) 箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態

傳(chuan) 代密度細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang)

傳(chuan) 代代數可傳(chuan) 5代左右；3代以內(nei) 狀態

傳(chuan) 代比例傳(chuan) 代建議1：2傳(chuan) 代，1:2傳(chuan) 代就是1個(ge) T25瓶傳(chuan) 2個(ge) T25瓶或者2個(ge) 6cm皿。不是1個(ge) T25瓶傳(chuan) 2個(ge) 10cm皿

傳(chuan) 代方法：

1.吸出T25細胞培養(yang) 瓶中的培養(yang) 基，用PBS清洗細胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yang) 瓶中，輕微轉動培養(yang) 瓶至消化液覆蓋整個(ge) 培養(yang) 瓶底後，吸出多餘(yu) 消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓後，再加入5ml培養(yang) 基終止消化；

3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yang) 瓶傳(chuan) 代，然後補充新鮮的培養(yang) 基至5mL，置於(yu) 37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yang) 箱中靜置培養(yang) ；

4.待細胞貼壁後，培養(yang) 觀察；之後每2-3天換液一次新鮮的培養(yang) 基。

公司正在出售的產(chan) 品：