小鼠原代腎小管上皮原代細胞

商品屬性：

細胞基本屬性：

種屬來源：小鼠

組織來源：腎髒腎髒

生長特性：貼壁生長

產(chan) 品規格：5x105cells/T25或1mL凍存管
換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：

產(chan) 品貨期：5-6周左右

運輸方式：T25培養(yang) 瓶/ 順豐(feng) 快遞（包郵）

供應限製：僅(jin) 限於(yu) 科學研究，絕不可作為(wei) 動物或人類疾病的治療產(chan) 品使用

背景介紹：:小鼠腎小管上皮細胞采用先機械研磨過不鏽鋼網篩分離得到腎小管、後用膠原酶消化，結合上皮細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基培養(yang) 篩選製備而來，小鼠腎小管上皮細胞分離自腎組織；腎髒是機體(ti) 的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體(ti) 內(nei) 代謝產(chan) 物及某些廢物、毒物，同時經重吸收功能保留水份及其他有用物質，如葡萄糖、蛋白質、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等，以調節水、電解質平衡及維護酸堿平衡。腎髒同時還有內(nei) 分泌功能，生成腎素、促紅細胞生成素、活性維生suD3、前列腺素、激肽等，又為(wei) 機體(ti) 部分內(nei) 分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎髒的這些功能，保證了機體(ti) 內(nei) 環境的穩定，使新陳代謝得以正常進行。腎小管是機體(ti) 腎髒器官上與(yu) 腎小囊壁層相連的一條細長上皮性小管，具有重吸收（reabsorption）和排泌作用。腎小管按不同的形態結構、分布位置和功能分成近端小管、髓袢和遠端小管三部分；近端小管可分為(wei) 直部和曲部，曲部也稱為(wei) 近曲小管，位於(yu) 皮質迷路內(nei) ，於(yu) 腎小體(ti) 附近高度蟠曲；遠端小管曲部也稱為(wei) 遠曲小管，位於(yu) 皮質迷路內(nei) 。腎小管上皮細胞是腎小管外麵的一層細胞，腎小管上皮細胞的分離、培養(yang) 是研究腎髒疾病的一項重要技術，目前該細胞分離方法有酶分離法、化學分離法篩網分離法、顯微解剖分離法、流式細胞儀(yi) 分離法等。腎小管上皮細胞主要功能：①腎小管上皮細胞重吸收原尿中幾乎全部的葡萄糖和氨基酸；②排泌非營養(yang) 物質進入終尿；③細胞能分泌炎症介質如細胞因子和趨化因子，通過產(chan) 生IL-8或直接趨化白細胞參與(yu) 急性炎症反應；④移植腎炎症和新月體(ti) 腎炎中PTEpiC表達IL-2R和MHC-Ⅱ類抗原，這說明腎小管上皮細胞參與(yu) 腎免疫損傷(shang) 的發生。隨著對腎間質纖維化機製研究的日漸加深，腎小管上皮細胞（RTECs）在其中的作用日益被人們(men) 重視。因此，提供良好的腎小管上皮細胞模型，在腎小管間質疾病的發病機製和治療藥物篩選的研究中是非常重要的。腎小管與(yu) 腎小囊壁層相連的一條細長上皮性小管，具有重吸收和排泌作用.腎小管按不同的形態結構，分布位置和功能分成三部分；近端小管、髓袢和遠端小管。腎小管平均長約30-50mm，均由單層上皮構成，缺血、感染和毒物可引起腎小管上皮細胞變性壞死，導致腎功能障礙。醛固酮、抗利尿激素、心鈉素、甲狀旁腺激素等，也可導致腎小管功能改變。由於(yu) 各段腎小管結構和功能不同，故出現功能障礙時表現各異。

細胞培養(yang) 操作：

收貨處理取出T25細胞培養(yang) 瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細胞培養(yang) 箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態

傳(chuan) 代密度細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang)

傳(chuan) 代代數可傳(chuan) 5代左右；3代以內(nei) 狀態

傳(chuan) 代比例傳(chuan) 代建議1：2傳(chuan) 代，1:2傳(chuan) 代就是1個(ge) T25瓶傳(chuan) 2個(ge) T25瓶或者2個(ge) 6cm皿。不是1個(ge) T25瓶傳(chuan) 2個(ge) 10cm皿

傳(chuan) 代方法：

1.吸出T25細胞培養(yang) 瓶中的培養(yang) 基，用PBS清洗細胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yang) 瓶中，輕微轉動培養(yang) 瓶至消化液覆蓋整個(ge) 培養(yang) 瓶底後，吸出多餘(yu) 消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓後，再加入5ml培養(yang) 基終止消化；

3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yang) 瓶傳(chuan) 代，然後補充新鮮的培養(yang) 基至5mL，置於(yu) 37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yang) 箱中靜置培養(yang) ；

4.待細胞貼壁後，培養(yang) 觀察；之後每2-3天換液一次新鮮的培養(yang) 基。

原代細胞培養(yang) 的主要步驟包括：

‌一、剝離組織，去除外膜、結締組織等‌：將組織從(cong) 動物體(ti) 中取出，並去除可能存在的外膜或結締組織等雜質。

二、‌洗滌後將組織剪成1mm左右的小塊‌：使用生理鹽水或其他適當的緩衝(chong) 液洗滌組織，然後將其剪成約1mm大小的小塊。

三、‌用0.1%～0.2%的消化‌：將剪碎的組織塊加入含有0.1%～0.2%的緩衝(chong) 液中，進行消化。消化時間可根據具體(ti) 實驗需求選擇熱消化（37℃）或冷消化（4℃），熱消化時間短，冷消化時間長但條件更溫和。

‌四、吹打分散後，過濾、計數‌：將消化後的細胞吹打到一個(ge) 離心管中，然後過濾、計數。

五、‌按30萬(wan) /毫升分瓶培養(yang) ‌：將計數後的細胞按30萬(wan) /毫升的濃度分瓶培養(yang) 。

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