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產(chan) 品名稱 | 骨肉瘤細胞；SW1353 |
生長特性 | 貼壁生長 |
貨號 | EY-X63569 |
細胞名稱 人骨肉瘤細胞；SW1353
形態特性: 成纖維細胞
生長特性: 貼壁生長
特征特性: SW1353細胞最初從(cong) 一位72歲女性白人的右肱骨原發性II級骨肉瘤中得到。最初的培養(yang) 基是含有可的鬆和胰島素的L-15添加10%FBS和抗生素。1982年１月ATCC收到１支傳(chuan) 代至12代的凍存管。
培養(yang) 條件: L15:LeibovitzMedium優(you) 質胎牛血清，10%
傳(chuan) 代方法: 消化3-5分鍾。1:2。3天內(nei) 可長滿。
傳(chuan) 代情況: P(25+5)
凍存條件: 基礎培養(yang) 基+8%DMSO+20%FBS
支原體(ti) 檢測: 陰性
產(chan) 品特點:
1、 使用方便:不需昂貴設備。
2、 可以處理各種細菌菌體(ti) ，包括新鮮菌液和冰凍菌體(ti) 。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鍾-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時，背景幹擾低。
7、 蛋白酶抑製劑抑製了蛋白的降解，蛋白酶抑製劑配方優(you) 化。蛋白酶抑製劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑製劑；每一種抑製劑可特異性抑製某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(you) 化的組成使其可以抑製幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA，與(yu) 金屬螯和層析等兼容。
培養(yang) 操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲(si) 綢布擦拭幹淨，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yang) 板（每孔一片）或培養(yang) 皿中（每個(ge) 平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射範圍內(nei) 20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yang) 板中，使蓋玻片*浸在培養(yang) 液中；
5．將培養(yang) 板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yang) 板底部2/3麵積時，將培養(yang) 板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗後即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗要點及說明：
1．本方法適用於(yu) 貼壁細胞培養(yang) ，而不適用於(yu) 懸浮細胞培養(yang) ，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為(wei) 優(you) 質玻璃，並經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養(yang) 皿，但不宜過大，以避免培養(yang) 液的浪費和增加汙染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鍾並自然晾幹。
操作流程：
1.1主要試劑與(yu) 儀(yi) 器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的複蘇培養(yang) 傳(chuan) 代及凍存：
1.2.1 細胞的複蘇培養(yang) 從(cong) 液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,並不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒後打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yang) 液（37℃預熱，8～10倍體(ti) 積）離心管內(nei) ,稍微吹打混勻,然後1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yang) 液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種於(yu) 25cm2培養(yang) 瓶內(nei) ，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yang) 。
1.2.2 細胞傳(chuan) 代 原代培養(yang) 的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%消化1～2min，將培養(yang) 瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為(wei) 使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然後加入倍量的培養(yang) 基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳(chuan) 代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察並記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞，待細胞變圓、脫壁並浮起，加入少量培養(yang) 基離心，再用pbs重懸並吹打製成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側(ce) 加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數，按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液＝(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生的細胞，以0.25％消化成單細胞懸液，計數後分別接種於(yu) 12個(ge) 25cm2培養(yang) 瓶中，每兩(liang) 小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yang) 基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ，計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生的細胞用消化製成單細胞懸液，以1×104/孔接種於(yu) 24孔板，每孔加入1ml培養(yang) 基。每天隨機取3孔，計數每孔細胞的數目並計算平均值。
Escherichia coli (Migula) Castellani and Ch ..細胞名稱: 幼倉(cang) 鼠腎傳(chuan) 代細胞；
類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用3-噻吩二酸Human SP2 ELISA Kit
抗人轉鐵蛋白單抗雜交瘤；Ferritin-1拉丁屬名: Yersinia pekkanenii3-噻吩二酸Human SOX12 ELISA Kit
抗人肝癌單抗HAb18雜交瘤；HAb18拉丁屬名: Escherichia coli EPEC O86：K61乙酰溴-α-D-葡萄糖酸甲酯Human SNX7 ELISA Kit
小鼠脾髒成纖維樣；C57/B6-SPL拉丁屬名: Yarrowia sp.3-氨基苯酸頻呐酯Human SOAT2 ELISA Kit
小鼠皮膚成纖維樣；C57/B6-S拉丁屬名: Staphylococcus aureus3-氨基苯酸頻呐酯Human SOCS5 ELISA Kit
小鼠雜交瘤；IIA3拉丁屬名: Bacillus subtilis2-聯苯Human SNX6 ELISA Kit
抗人TATA框結合蛋白交互作用蛋白單抗雜交瘤；1C6/B7拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae2-聯苯Human SNUPN ELISA Kit
肌動蛋白結合蛋白1B單抗雜交瘤；actin binding protein, 1B拉丁屬名: Fusarium moniliforme Sheldon3-溴聯苯Human SNW1 ELISA Kit
抗人SH3-結構域結合蛋白單抗雜交瘤；SH3-domain binding protein拉丁屬名: Escherichia coli3-溴聯苯Human SNX17 ELISA Kit
抗人羧酶A單抗雜交瘤 ；aldolase A拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae3-溴聯苯Human SNX15 ELISA Kit
抗人微管蛋白-alpha單抗雜交瘤；3C8C8A12C2用途: 降解纖維素(degrades cellulose)1,5-萘二磺酸，四水Human SNX18
骨肉瘤細胞；SW1353人抗丙型肝炎病抗體(ti) (anti-HCV)ELISA試劑盒sTRAILELISAKIT產(chan) 品規格:48T/96T。
人抗丁型肝炎病抗體(ti) (anti-HDV)ELISA試劑盒sTRAILELISAKIT產(chan) 品規格:48T/96T。
人抗弓形體(ti) IgG抗體(ti) (anti-toxIgG)ELISA試劑盒sVCAM-1ELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人抗弓形體(ti) IgM抗體(ti) (anti-toxIgM)ELISA試劑盒sVCAM-1ELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人抗甲型肝炎病IgG抗體(ti) (anti-HAV)ELISA試劑盒sVCAM-1ELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人抗甲型肝炎病IgM抗體(ti) (anti-HAV)ELISA試劑盒sVCAM-1ELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人抗巨細胞病抗體(ti) IgM(anti-CMVIgM)ELISA試劑盒sVCAM-1ELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人抗乙型肝炎病e抗體(ti) (HBeAb)ELISA試劑盒sVCAM-1ELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
