實驗要點及說明：
1．本方法適用於(yu) 貼壁細胞培養(yang) ，而不適用於(yu) 懸浮細胞培養(yang) ，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為(wei) 優(you) 質玻璃，並經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養(yang) 皿，但不宜過大，以避免培養(yang) 液的浪費和增加汙染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鍾並自然晾幹。
公司細胞廣泛用於(yu) 國內(nei) 院校的細胞生物學研究，作為(wei) 實驗項目研究。下列產(chan) 品詳細介紹：
產(chan) 品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
肺腺癌細胞；Lu-165 | 貼壁生長 | EY-X63537 |
細胞名稱 肺腺癌細胞；Lu-165
形態特性: 上皮樣細胞
生長特性: 貼壁生長
特征特性:
培養(yang) 條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳(chuan) 代方法: 1:3傳(chuan) 代,2-3天傳(chuan) 一代
傳(chuan) 代情況: PN
凍存條件: 基礎培養(yang) 基+8%DMSO+20%FBS
支原體(ti) 檢測: 陰性
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置於(yu) 4℃ 30~60 分鍾→ （-20 ℃30 分鍾*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chu) 存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置於(yu) 已設定程序之可程序降溫機中每分鍾降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chu) 存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與(yu) 培養(yang) ：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然後用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之後用滴管吹打製成單細胞懸液，自然沉澱並收集上清，用含10% FBS培養(yang) 基終止消化後4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min後，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置，重複此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yang) 基混懸，接種於(yu) 25cm2培養(yang) 瓶，放置於(yu) 37℃ ，5％CO2 培養(yang) 箱中培養(yang) ；
5、差速貼壁1h後，吸出培養(yang) 基，按實驗需要接種於(yu) 6孔板中繼續培養(yang) ；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yang) 基，用溫育的PBS衝(chong) 洗細胞2次，每次10min，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS衝(chong) 洗細胞2次，每次10min，然後在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS衝(chong) 洗細胞2次，每次10min，然後在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS衝(chong) 洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS衝(chong) 洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yang) 液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yang) 液洗滌細胞一次，以去除殘餘(yu) 的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，並且肉眼觀察培養(yang) 器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變
化；或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來，吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yang) 液，吹打下細胞，即可直接用於(yu) 後續實驗。
④如果發現消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發現細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經有部分直接從(cong) 培養(yang) 器皿底部脫落， 直接用細胞培養(yang) 液把細胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉澱細胞，盡量去除細胞消化液後，加入含血清的*培養(yang) 液重新懸浮細胞，即可用於(yu) 後續實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化後可以充分打散組織為(wei) 宜。
freeze-dried細胞名稱: 雜交瘤細胞；A375sci RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
基肼 Human SUN1 ELISA Kit
小鼠雜交瘤株；1-E11用途: 研究苄基肼 Human SUOX ELISA Kit
小鼠雜交瘤株；GP73-5B4-G6-C9-C6-G4拉丁屬名: Rhizobium herbae苯並(b)螢蒽Human SYCE1 ELISA Kit
小鼠雜交瘤株；NS3-2A5-E1-H2拉丁屬名: Diplocarpon rosae 雙羥甲基二酸二乙酯Human STT3A ELISA Kit
小鼠雜交瘤株；SZCIQASFV2注意事項: 僅用於科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用於人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用四氨合硝酸鉑Human SUPT16H ELISA Kit
小鼠雜交瘤株；SZCIQASFV1用途: 應用四氨合硝酸鉑Human STT3B ELISA Kit
小鼠雜交瘤株；GPC3-1H5拉丁屬名: Candida saitoanaDarunavirHuman STXBP2 ELISA Kit
小鼠雜交瘤株；Hyb-hOct4-138拉丁屬名: Bacillus megaterium4-氯-3-氟苄基溴Human STXBP1(Syntaxin-binding protein 1) ELISA Kit
小鼠雜交瘤株；PP65注意事項: 僅用於科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用於人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用4-氯-3-氟苄基溴Human STXBP3 ELISA Kit
小鼠雜交瘤株；2B11拉丁屬名: Klebsiella sp.1-正-丁基-4-苯Human STXBP4 ELISA Kit
小鼠雜交瘤株；Flounder IgM-H規格: 西林瓶凍幹粉4-丁基苯甲酸Human IFI6(Interferon alpha-inducible protein 6) ELISA Kit
肺腺癌細胞；Lu-165人抗心磷脂抗體(ti) IgM(ACA-IgM)ELISA試劑盒PTHrpELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人抗心磷脂抗體(ti) IgA(ACA-IgA)ELISA試劑盒PTHrPELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人β2糖蛋白1抗體(ti) IgG(β2-GP1AbIgG)ELISA試劑盒PTKELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人β2糖蛋白1抗體(ti) IgM(β2-GP1AbIgM)ELISA試劑盒PV-IgGELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人β2糖蛋白1抗體(ti) IgA(β2-GP1AbIgA)ELISA試劑盒PWMELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人皰疹抗體(ti) (HG)ELISA試劑盒PYDELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人落葉型天皰瘡抗體(ti) (PF)ELISA試劑盒PYDELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人膜聯蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA試劑盒PYELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
