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產(chan) 品名稱 | 家貓腎細胞;CATK1 |
生長特性 | 貼壁生長 |
貨號 | EY-X63738 |
細胞名稱 家貓腎細胞;CATK1
形態特性: 上皮樣,多角形
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細胞來源於(yu) 一雄性家貓的腎組織。2000年由中國科學院昆明細胞庫建立。
培養(yang) 條件: M-199:withEarle'sBalancedSaltsSolution(EBSS)15%NBS
傳(chuan) 代方法: 1:2傳(chuan) 代;3-4天一次
傳(chuan) 代情況: P4
凍存條件: 基礎培養(yang) 基+8%DMSO+20%FBS
支原體(ti) 檢測: 熒光法(-)
產(chan) 品特點:
1、 使用方便:不需昂貴設備。
2、 可以處理各種細菌菌體(ti) ,包括新鮮菌液和冰凍菌體(ti) 。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鍾-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩定劑,提取的蛋白穩定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時,背景幹擾低。
7、 蛋白酶抑製劑抑製了蛋白的降解,蛋白酶抑製劑配方優(you) 化。蛋白酶抑製劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑製劑;每一種抑製劑可特異性抑製某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(you) 化的組成使其可以抑製幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA,與(yu) 金屬螯和層析等兼容。
培養(yang) 操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲(si) 綢布擦拭幹淨,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yang) 板(每孔一片)或培養(yang) 皿中(每個(ge) 平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射範圍內(nei) 20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yang) 板中,使蓋玻片*浸在培養(yang) 液中;
5.將培養(yang) 板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yang) 板底部2/3麵積時,將培養(yang) 板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗後即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗要點及說明:
1.本方法適用於(yu) 貼壁細胞培養(yang) ,而不適用於(yu) 懸浮細胞培養(yang) ,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為(wei) 優(you) 質玻璃,並經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養(yang) 皿,但不宜過大,以避免培養(yang) 液的浪費和增加汙染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鍾並自然晾幹。
操作流程:
1.1主要試劑與(yu) 儀(yi) 器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的複蘇培養(yang) 傳(chuan) 代及凍存:
1.2.1 細胞的複蘇培養(yang) 從(cong) 液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,並不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒後打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yang) 液(37℃預熱,8~10倍體(ti) 積)離心管內(nei) ,稍微吹打混勻,然後1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yang) 液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種於(yu) 25cm2培養(yang) 瓶內(nei) ,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yang) 。
1.2.2 細胞傳(chuan) 代 原代培養(yang) 的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%消化1~2min,將培養(yang) 瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為(wei) 使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然後加入倍量的培養(yang) 基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳(chuan) 代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察並記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞,待細胞變圓、脫壁並浮起,加入少量培養(yang) 基離心,再用pbs重懸並吹打製成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側(ce) 加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生的細胞,以0.25%消化成單細胞懸液,計數後分別接種於(yu) 12個(ge) 25cm2培養(yang) 瓶中,每兩(liang) 小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yang) 基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生的細胞用消化製成單細胞懸液,以1×104/孔接種於(yu) 24孔板,每孔加入1ml培養(yang) 基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目並計算平均值。
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CAS No.:52250-38-1
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分子式:C17H16O6
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