公司細胞廣泛用於(yu) 國內(nei) 院校的細胞生物學研究,作為(wei) 實驗項目研究。下列產(chan) 品詳細介紹:
產(chan) 品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
胚腎細胞;293Cells,lowpassage | 貼壁生長 | EY-X63493 |
細胞名稱 胚腎細胞;293Cells,lowpassage
形態特性: 上皮細胞
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 293細胞是胚胎腎細胞用剪切過的腺病毒5DNA轉化得到,它們(men) 包含並表達腺病毒5的早期區段1,包含並表達腺病毒5的早期區段1,能互補E1失活的腺病毒突變株和載體(ti) ,使其生長;在DNA轉染檢測中它們(men) 是特別有效的受體(ti) 細胞;對於(yu) 大多數即使不是全部人腺病毒的生長和溶菌斑測試,它們(men) 也表現很好。這些細胞廣泛應用於(yu) 因缺失或代換E1序列引起的E1失活突變株和腺病毒載體(ti) 的繁殖與(yu) 滴定;因此它們(men) 被用來構建腺病毒載體(ti) ,用於(yu) 構建腺病毒載體(ti) 使用低代數細胞,一般不超過40代,對於(yu) 保持這株細胞的優(you) 良特性,正確的細胞培養(yang) 方法十分重要。
培養(yang) 條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優(you) 質胎牛血清,10%
傳(chuan) 代方法: 消化3-5分鍾。1:2。3天內(nei) 可長滿。
傳(chuan) 代情況: P(27+5)
凍存條件: 基礎培養(yang) 基+8%DMSO+20%FBS
支原體(ti) 檢測: 陰性
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置於(yu) 4℃ 30~60 分鍾→ (-20 ℃30 分鍾*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲(chu) 存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置於(yu) 已設定程序之可程序降溫機中每分鍾降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲(chu) 存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明:
1.本方法適用於(yu) 貼壁細胞培養(yang) ,而不適用於(yu) 懸浮細胞培養(yang) ,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為(wei) 優(you) 質玻璃,並經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養(yang) 皿,但不宜過大,以避免培養(yang) 液的浪費和增加汙染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鍾並自然晾幹。
實驗報告:
一、分離與(yu) 培養(yang) :
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然後用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之後用滴管吹打製成單細胞懸液,自然沉澱並收集上清,用含10% FBS培養(yang) 基終止消化後4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min後,按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置,重複此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉澱細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yang) 基混懸,接種於(yu) 25cm2培養(yang) 瓶,放置於(yu) 37℃ ,5%CO2 培養(yang) 箱中培養(yang) ;
5、差速貼壁1h後,吸出培養(yang) 基,按實驗需要接種於(yu) 6孔板中繼續培養(yang) ;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yang) 基,用溫育的PBS衝(chong) 洗細胞2次,每次10min,然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS衝(chong) 洗細胞2次,每次10min,然後在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS衝(chong) 洗細胞2次,每次10min,然後在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS衝(chong) 洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS衝(chong) 洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照。
rmIL-12 p40 Homodimer, CF (25 UG)細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;HBG19-4 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-12 p40 Homodimer (25 UG)細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;HB10.2 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-12 (50 UG)細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;HBG3-5 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-12 (10 UG)細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;HBG10-1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-11, CF (5 UG)細胞名交瘤細胞係;HybridLivercellGLH04 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-11, CF (25 UG)細胞雜交瘤細胞係;HybridLivercellGLH03 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-11 Ra/Fc, CF (200 UG)細交瘤細胞係;HybridLivercellGLH02 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-11 Ra/Fc (200 UG)細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;HBNI8 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-11 (5 UG)細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;HBPE9 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-11 (25 UG)細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;HBBrE-2 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-10, CF (5 UG)細胞名稱: 小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞;UK1-3 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-10, CF (25 UG)細胞名稱: 小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞;FIB2-11 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-10 Ra, CF (25 UG)細胞名稱: 小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞;UK1-87 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-10 Ra (25 UG)細胞名稱: 小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞係;TPA1-41 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-10 (Cys149Tyr), CF (10 UG)細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;HBPG11 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-10 (Cys149Tyr) (10 UG)細胞名稱: 小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞;FIB1-11 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
胚腎細胞;293Cells,lowpassage人鈣網蛋白(CRT)ELISA試劑盒NGFELISAkit產(chan) 品規格:48T/96T。
人纖調蛋白(fibromodulin)ELISA試劑盒NHE3ELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人促睡眠肽(DSIP)ELISA試劑盒NKBELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人T細胞急性淋巴母細胞白血病相關(guan) 抗原(TALLA-1/CD231)ELISA試劑盒NLRELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人蛋白C(ProteinC)ELISA試劑盒N-MID-OTELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人膠原凝集素(Collectin)ELISA試劑盒NMP-22ELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人肌養(yang) 蛋白(dystrophin)ELISA試劑盒NNEELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人嗜環蛋白/親(qin) 環素A(CyPA)ELISA試劑盒NN-T4ELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yang) 液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yang) 液洗滌細胞一次,以去除殘餘(yu) 的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,並且肉眼觀察培養(yang) 器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yang) 液,吹打下細胞,即可直接用於(yu) 後續實驗。
④如果發現消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從(cong) 培養(yang) 器皿底部脫落, 直接用細胞培養(yang) 液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉澱細胞,盡量去除細胞消化液後,加入含血清的*培養(yang) 液重新懸浮細胞,即可用於(yu) 後續實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化後可以充分打散組織為(wei) 宜。