實驗要點及說明：
1．本方法適用於(yu) 貼壁細胞培養(yang) ，而不適用於(yu) 懸浮細胞培養(yang) ，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為(wei) 優(you) 質玻璃，並經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養(yang) 皿，但不宜過大，以避免培養(yang) 液的浪費和增加汙染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鍾並自然晾幹。
公司細胞廣泛用於(yu) 國內(nei) 院校的細胞生物學研究，作為(wei) 實驗項目研究。下列產(chan) 品詳細介紹：
產(chan) 品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
肝癌細胞；Li-7 | 貼壁生長 | EY-X63929 |
細胞名稱 肝癌細胞；Li-7
形態特性: 上皮細胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 人肝癌細胞株。這株細胞從(cong) 裸鼠體(ti) 外移植瘤中建立。
培養(yang) 條件: RPMI1640(w/oHepes)優(you) 質胎牛血清，10%
傳(chuan) 代方法: 消化3-5分鍾。1:2。3天內(nei) 可長滿。
傳(chuan) 代情況: PN5
凍存條件: 基礎培養(yang) 基+8%DMSO+20%FBS
支原體(ti) 檢測: 陰性
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置於(yu) 4℃ 30~60 分鍾→ （-20 ℃30 分鍾*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chu) 存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置於(yu) 已設定程序之可程序降溫機中每分鍾降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chu) 存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與(yu) 培養(yang) ：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然後用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之後用滴管吹打製成單細胞懸液，自然沉澱並收集上清，用含10% FBS培養(yang) 基終止消化後4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min後，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置，重複此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yang) 基混懸，接種於(yu) 25cm2培養(yang) 瓶，放置於(yu) 37℃ ，5％CO2 培養(yang) 箱中培養(yang) ；
5、差速貼壁1h後，吸出培養(yang) 基，按實驗需要接種於(yu) 6孔板中繼續培養(yang) ；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yang) 基，用溫育的PBS衝(chong) 洗細胞2次，每次10min，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS衝(chong) 洗細胞2次，每次10min，然後在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS衝(chong) 洗細胞2次，每次10min，然後在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS衝(chong) 洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS衝(chong) 洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yang) 液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yang) 液洗滌細胞一次，以去除殘餘(yu) 的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，並且肉眼觀察培養(yang) 器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變
化；或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來，吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yang) 液，吹打下細胞，即可直接用於(yu) 後續實驗。
④如果發現消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發現細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經有部分直接從(cong) 培養(yang) 器皿底部脫落， 直接用細胞培養(yang) 液把細胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉澱細胞，盡量去除細胞消化液後，加入含血清的*培養(yang) 液重新懸浮細胞，即可用於(yu) 後續實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化後可以充分打散組織為(wei) 宜。
Anoctamin-1蛋白檢測試劑盒細胞名稱: Cas9穩定表達
枸櫞酸奧芬那君;枸酸芬那君4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb (PE Conjuga)輪環藤寧
β-半糖苷酶Notch1 (5B5) Rat mAb12-冠-4
脫落酸(標準品)TDP43 (G400) Antibody甲基硫代磺酸甲酯
脫落酸(高純)p70 S6 Kinase MCF7 Control Cell Extracts1,2,3,四氫-2-萘
脫落酸,S-誘抗素; 壯芽靈TDP43 (A260) Antibody3,5-二羥基甲
(1:3000)PSD95 (D27E11) XP® Rabbit mAb三銀
核糖核酸酶A(sigma)PSD95 (D27E11) XP® Rabbit mAb溴吡啶甲酸甲酯
S-4MLANA/MART-1 Antibody5-溴甲酯
(1:12000)Phospho-μ-Opioid Receptor (Ser375) Antibody伯吉斯試劑
蛋白酶K(進分)Rabbit IgG Isotype Control (Alexa Fluor® 647 Conjuga)呱啶甲酸甲酯
蛋白酶K(Sigma)Phospho-Doublecortin (Ser334) Antibody3,5-二溴-羥基甲
胰凝蛋白酶抑製劑CMTM6 Antibody2-溴-5-羥基甲
亮抑蛋白酶肽(進口)Phospho-DRP1 (Ser616) Antibody異甲酯
胃酶抑素A;抑肽素;抑製劑MeCP2 (D4F3) XP® Rabbit mAb二硫代酸二酯
岩藻糖；L-岩藻糖MeCP2 (D4F3) XP® Rabbit mAb1-氨基酮鹽酸鹽
果膠酶JMJD3 Antibody7-溴庚酸酯
β-(70萬u/ml液體)HDAC1 (D5C6U) XP® Rabbit mAb7-氨基庚酸酯鹽酸鹽
β-(酶活5萬粉末)HDAC1 (D5C6U) XP® Rabbit mAb(1S,2S)-1,2-二基二
DNA酶,脫氧核糖核酸酶ⅠPhospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2,5-二氟甲酸
高峰來源於米曲黴(4000U/g)1BB/CD137/TNFRSF9 (D2Z4Y) Rabbit mAb基*氧基矽烷
高峰來源於米曲黴(100U/mg )Phospho-FLT3 (Tyr591) Antibody2,2'-偶氮二異丁基脒
甘油-酸脫氫酶FLT3 (8F2) Rabbit mAb
Phospho-FLT3 (Tyr969) (C24D9) Rabbit mAb2-氟磺酰
DL-對氨酸Clusrin (D7N2K) XP® Rabbit mAb辛酸亞錫
延胡素酸氨基酯Clusrin (D7N2K) XP® Rabbit mAb肼(無水)
輔羧酶;羧化輔酶;焦酸硫素Ajuba (D4D8P) Rabbit mAb鹽酸丁脒
吲哚酸酯Phospho-FLT3 (Tyr589/591) (30D4) Rabbit mAb硫酸鹽
α-環糊精Phospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)呱-2-羧酸
氧化酶(XOD)Phospho-FLT3 (Tyr591) (54H1) Mouse mAb3,二甲酰
酰化酶,L-氨基酰化酶Perilipin-1 (K117) Antibody2-氨基-N-(2--6-基)噻唑-5-甲酰
1:250eIF4G2/p97 (D1A10) Rabbit mAb2-氨基-5-溴噻唑
1:2500TrK (pan) (A7H6R) Rabbit mAb (Biotinylad)硝基咪唑
阿利多eIF4H (D85F2) XP® Rabbit mAb1-甲基-硝基咪唑
核糖核酸酶A(美侖)；RNase A;核糖核酸酶IeIF4H (D85F2) XP® Rabbit mAb5-溴噻唑
5‘-酸吡哆，一水Perilipin-1 (D418) Antibody2-咪唑
NADPH;還原輔酶Ⅱ四鈉鹽;(羅氏)Phospho-FGF Receptor (Tyr653/654) Antibody2-(三氟甲基)基
；RBE-Cas9-784形態特性: 上皮樣Calcium channel antibody
肝癌細胞；Li-7百蕊草素I40437-72-7中文別名：阿福豆苷；山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷；山柰酚-3-O-葡萄糖鼠李 糖苷
英文名：Kaempferol-3-O-glucorhamnoside
CAS登錄號：40437-72-7
分子式：C27H30O15
分子量：594.16
分子結構：
規格：20mg/支
純度：≥ 98%
用途：用於(yu) 含量測定/鑒定/藥理實驗等。
提取來源：檀香科多年生半寄生草本植物百蕊草Thesium chinense Turcz．的全草
藥理藥效：有抗菌消炎，清熱解等作用。
貯存條件： 4℃冷藏、密封、避光
有效期： 2年
