實驗要點及說明：
1．本方法適用於(yu) 貼壁細胞培養(yang) ，而不適用於(yu) 懸浮細胞培養(yang) ，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為(wei) 優(you) 質玻璃，並經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養(yang) 皿，但不宜過大，以避免培養(yang) 液的浪費和增加汙染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鍾並自然晾幹。
公司細胞廣泛用於(yu) 國內(nei) 院校的細胞生物學研究，作為(wei) 實驗項目研究。下列產(chan) 品詳細介紹：
產(chan) 品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
正常乳腺上皮細胞；MCF10A | 貼壁生長 | EY-X63499 |
細胞名稱 正常乳腺上皮細胞；MCF10A
形態特性: 上皮細胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性:
培養(yang) 條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳(chuan) 代方法: 1:2。3天內(nei) 可長滿。
傳(chuan) 代情況: 97
凍存條件: 基礎培養(yang) 基+8%DMSO+20%FBS
支原體(ti) 檢測: 陰性
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置於(yu) 4℃ 30~60 分鍾→ （-20 ℃30 分鍾*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chu) 存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置於(yu) 已設定程序之可程序降溫機中每分鍾降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chu) 存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與(yu) 培養(yang) ：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然後用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之後用滴管吹打製成單細胞懸液，自然沉澱並收集上清，用含10% FBS培養(yang) 基終止消化後4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min後，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置，重複此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yang) 基混懸，接種於(yu) 25cm2培養(yang) 瓶，放置於(yu) 37℃ ，5％CO2 培養(yang) 箱中培養(yang) ；
5、差速貼壁1h後，吸出培養(yang) 基，按實驗需要接種於(yu) 6孔板中繼續培養(yang) ；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yang) 基，用溫育的PBS衝(chong) 洗細胞2次，每次10min，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS衝(chong) 洗細胞2次，每次10min，然後在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS衝(chong) 洗細胞2次，每次10min，然後在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS衝(chong) 洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS衝(chong) 洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yang) 液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yang) 液洗滌細胞一次，以去除殘餘(yu) 的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，並且肉眼觀察培養(yang) 器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變
化；或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來，吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yang) 液，吹打下細胞，即可直接用於(yu) 後續實驗。
④如果發現消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發現細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經有部分直接從(cong) 培養(yang) 器皿底部脫落， 直接用細胞培養(yang) 液把細胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉澱細胞，盡量去除細胞消化液後，加入含血清的*培養(yang) 液重新懸浮細胞，即可用於(yu) 後續實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化後可以充分打散組織為(wei) 宜。
rmGDF-8 Pro (25 UG)細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞；MAER-S1 RPMI1640(
鹽酸鹽EHMT1 (E6Q8B) Rabbit mAb嘧啶甲酸
硫酸鹽SignalSilence® cdc2 siRNA I(S)-1-N-BOC-呱甲酸甲酯
腺嘌呤鹽酸鹽PDI (C81H6) Rabbit mAb嘧啶-2-羧酸
；次核苷PDI (C81H6) Rabbit mAb2-氟-甲酸
(標準品)Cortactin Antibody二並[b,f][1,4]硫氮雜卓-11-[10H]酮
5‘-腺嘌呤核苷酸二鈉鹽(AMP2Na)ATF-2 (D4L2X) XP® Rabbit mAb硝基鄰二甲
5‘-腺嘌呤核苷酸二鈉鹽(AMP2Na)ATF-2 (D4L2X) XP® Rabbit mAb2-氨基嘧啶-5-羧酸
5-溴-2’-脫氧尿苷(BRDU)Cortactin (H222) Antibody(甲基)甲酸
胞苷；胞嘧啶核苷TBK1/NAK (D1B4) Rabbit mAb環己基異酸酯
胞嘧啶核苷,胞苷(標準品)TBK1/NAK (D1B4) Rabbit mAb(3aR,4S,5R,6aS)-(-)-六氫-(羥甲基)-2-氧代-2H-環戊並[b]呋喃-5-基 1,1'-聯-甲酸酯
dATP,三酸脫氧腺苷鈉鹽AUP1 (D5M9Q) Rabbit mAb反式-(1R,2R)-2-氨基環戊鹽酸鹽
dGTP;三酸脫氧鳥苷鈉鹽Asymmetric-Methyl-PABP1 (Arg455/Arg460) (C60A10) Rabbit mAb二甲氨基-1-
dCTP;三酸脫氧胞苷鈉鹽Phospho-NDRG1 (Ser330) Antibody JH-M902
dTTP;2‘-脫氧胸苷-5’三酸鈉鹽(dTTP)Sav1 AntibodyL-氨
2‘-脫氧尿苷Brg1 (A52) Antibody2-氨基噻吩-甲酸酯
β-胸苷(dT);2'-脫氧胸苷Brg1 (A52) Antibody2-溴丁酸甲酯
2’-脫氧鳥苷;2'-dGPhospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb (Sepharose®Bead Conjuga)5,6-二氨基脲嘧啶
2‘-脫氧胞苷Phospho-Connexin 43 (Ser368) Antibody溴-2-三氟甲酸
2‘-脫氧胞苷(標準品)Connexin 43 Antibody2--5-氨基三氟甲
2’-脫氧腺苷Brg1 (P680) Antibody3,5-二氟甲
魚精DNAMLH1 (4C9C7) Mouse mAb2-氟-5-甲酸
鮭魚精DNAMLH1 (4C9C7) Mouse mAb2-IODOPYRAZINE
5-氟脫氧胞苷Phospho-NPM (Thr95) Antibody1-氟萘
5-氟-2‘-脫氧尿苷;氟尿苷Cas9 (7A9-3A3) Mouse mAb (PE Conjuga)2,6-二
鳥苷;核苷Phospho-Keratin 17 (Ser44) Antibody對基甲
核苷(標準品)Phospho-NPM (Ser4) (D19C1) XP® Rabbit mAb6-甲基吡啶-甲酸
GDPNa2;5’-二酸鳥苷二鈉Phospho-NPM (Ser4) (D19C1) XP® Rabbit mAb(-)-6beta-羥甲基-7alpha-羥基-順式-2-氧雜雙環[3.3.0]辛-酮
SU11274Phospho-MDM2 (Ser166) Antibody化釤
尿苷；核苷Phospho-PNK1 (Ser114/Thr118) Antibody7-溴-3,二氫-2H-1-萘酮
核苷,尿苷(標準品)RalB Antibody2-萘酸
UTP;5‘-三酸尿苷三鈉UCHL1 Antibody(2-基)嗎啉
E-64d,蛋白酶抑製劑,阿洛司他丁UCHL3 Antibody(S)-1-N-Boc-2-基呱
2’-脫氧胞苷-5‘-酸二鈉鹽RalA Antibody二對甲酰
dAMP;2’-脫氧腺苷-5‘-單酸AMPK Substra Antibody Sampler Kit2-氟基
黃素腺嘌呤二核苷酸二鈉鹽Ezh2 (AC22) Mouse mAb (PE Conjuga)羥甲基咪唑鹽酸鹽
己烷雌酚(標準品)CD31 (PECAM-1) (89C2) Mouse mAb2-氟-6-甲
正常乳腺上皮細胞；MCF10A人SH2攜帶蛋白(SHC/SLP-76)ELISA試劑盒OCTELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人T細胞活化連接蛋白(LAT)ELISA試劑盒ODCELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人降解加速因子(DAF)ELISA試劑盒ODFELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人原鈣黏素1(PCDH1)ELISA試劑盒ODFELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人GTP酶活化蛋白(GAP)ELISA試劑盒OFQ/NELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人結合蛋白(RBP)ELISA試劑盒OFQ/NELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人嗜環蛋白/親(qin) 環素B(CyPB)ELISA試劑盒OFQ/NELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人β內(nei) 啡肽(β-EP)ELISA試劑盒OGPELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
