實驗要點及說明：
1．本方法適用於(yu) 貼壁細胞培養(yang) ，而不適用於(yu) 懸浮細胞培養(yang) ，懸浮細胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應該為(wei) 優(you) 質玻璃，並經過鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養(yang) 皿，但不宜過大，以避免培養(yang) 液的浪費和增加汙染機率； 
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鍾並自然晾幹。
公司細胞廣泛用於(yu) 國內(nei) 院校的細胞生物學研究，作為(wei) 實驗項目研究。下列產(chan) 品詳細介紹：

​
細胞名稱  小鼠胚胎幹細胞；ES-D3(CRL-1934)
形態特性: 球形

生長特性: 貼壁生長

特征特性: 小鼠胚胎幹細胞；在缺乏滋養(yang) 層或條件培養(yang) 基時，這株細胞自發分化成胚胎結構。它們(men) 可以注射回胚泡並參與(yu) 形成生殖係。未分化細胞可以通過基因靶向技術進行基因改良。貼壁生長；形成球形。

培養(yang) 條件: 幹細胞培養(yang) 基

傳(chuan) 代方法:

傳(chuan) 代情況: PN

凍存條件: 基礎培養(yang) 基+8%DMSO+20%FBS

支原體(ti) 檢測: 陰性
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置於(yu) 4℃ 30~60 分鍾→ （-20 ℃30 分鍾*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chu) 存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置於(yu) 已設定程序之可程序降溫機中每分鍾降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chu) 存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與(yu) 培養(yang) ：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然後用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之後用滴管吹打製成單細胞懸液，自然沉澱並收集上清，用含10% FBS培養(yang) 基終止消化後4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min後，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置，重複此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yang) 基混懸，接種於(yu) 25cm2培養(yang) 瓶，放置於(yu) 37℃ ，5％CO2 培養(yang) 箱中培養(yang) ；
5、差速貼壁1h後，吸出培養(yang) 基，按實驗需要接種於(yu) 6孔板中繼續培養(yang) ；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yang) 基，用溫育的PBS衝(chong) 洗細胞2次，每次10min，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS衝(chong) 洗細胞2次，每次10min，然後在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS衝(chong) 洗細胞2次，每次10min，然後在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS衝(chong) 洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS衝(chong) 洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yang) 液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yang) 液洗滌細胞一次，以去除殘餘(yu) 的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，並且肉眼觀察培養(yang) 器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變
化；或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來，吸除細胞消化液。加入含血清的  *細胞培養(yang) 液，吹打下細胞，即可直接用於(yu) 後續實驗。
④如果發現消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發現細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經有部分直接從(cong) 培養(yang) 器皿底部脫落， 直接用細胞培養(yang) 液把細胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉澱細胞，盡量去除細胞消化液後，加入含血清的*培養(yang) 液重新懸浮細胞，即可用於(yu) 後續實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化後可以充分打散組織為(wei) 宜。
rmDLL4, CF (50 UG)細胞名稱: 棕果蝠肺成纖維細胞；FFBL3 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)15%NBS

rmDLL4 (50 UG)細胞名稱: 棕果蝠皮膚成纖維細胞；FFBS3 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)15%NBS

rmDLL1/Fc, CF (50 UG)細胞名稱: 人胚胎皮膚成纖維細胞；HES DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)15%NBS

rmDkk-4, CF (10 UG)細胞名稱: 人皮膚成纖維細胞；HSAS4 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)15%NBS

rmDkk-4 (10 UG)細胞名稱: 人肺癌細胞；A549[A-549] RPMI1640(w/oHepes)15%NBS

rmDkk-2, CF (10 UG)細胞名稱: 恒河猴肺細胞；RM-L1 McCoy's5AMedia(ModifiedwithTricine)15%NBS

rmDkk-2 (10 UG)細胞名稱: 大長舌果蝠肺細胞；DBL1 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)15%NBS

rmDkk-1, CF (10 UG)細胞名稱: 中國倉(cang) 鼠卵巢細胞K1(亞(ya) 係克隆)；CHO-K1 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)15%NBS

rmDkk-1 (His-tag), CF (10 UG)細胞名稱: 小鼠胚胎細胞；BABL/C-E M-199:withEarle'sBalancedSaltsSolution(EBSS)15%NBS

rmDkk-1 (His-tag) (10 UG)細胞名稱: 大長舌果蝠肌肉細胞；DBM1 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)15%NBS

rmDkk-1 (10 UG)細胞名稱: 豚鼠肺細胞；GP-F1 M-199:withEarle'sBalancedSaltsSolution(EBSS)15%NBS

rmDhh-N, CF (50 UG)細胞名稱: 豚鼠皮膚細胞；GP-S1 M-199:withEarle'sBalancedSaltsSolution(EBSS)15%NBS

rmDermatopontin, CF細胞名稱: 豚鼠皮膚細胞；GP-S2 M-199:withEarle'sBalancedSaltsSolution(EBSS)15%NBS

rmDectin-2a, CF (50 UG)細胞名稱: 小鼠肺成纖維細胞；WML2 RPMI1640(w/oHepes)15%NBS

rmDectin-1,CF (50 UG)細胞名稱: 豚鼠心肌細胞；GP-H1 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)15%NBS

rmDecorin, CF (100 UG)細胞名稱: 豚鼠皮膚細胞；GP-S3 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)15%NBS
小鼠胚胎幹細胞；ES-D3(CRL-1934)人血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒PⅢNPELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。

人血小板反應蛋白/敏感蛋白1(TSP-1)ELISA試劑盒PⅢNPELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。

人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA試劑盒PⅢNPELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。

人纖溶抑製因子/激活的纖溶抑製物(TAFI)ELISA試劑盒PⅢNPELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。

人11去氫血栓B2(11-DH-TXB2)ELISA試劑盒PⅢNPELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。

人2,3Dinor血栓B2(2,3-dinor-TXB2)ELISA試劑盒PⅢNTELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。

人溶血補體(ti) (Hc)ELISA試劑盒PⅢNTELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。

人血栓調節蛋白複合物(T-TM)ELISA試劑盒PⅢNTELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。