實驗要點及說明：
1．本方法適用於(yu) 貼壁細胞培養(yang) ，而不適用於(yu) 懸浮細胞培養(yang) ，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為(wei) 優(you) 質玻璃，並經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養(yang) 皿，但不宜過大，以避免培養(yang) 液的浪費和增加汙染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鍾並自然晾幹。
公司細胞廣泛用於(yu) 國內(nei) 院校的細胞生物學研究，作為(wei) 實驗項目研究。下列產(chan) 品詳細介紹：
產(chan) 品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
結直腸腺癌細胞；HT-29 | 貼壁生長 | EY-X63288 |
細胞名稱 結直腸腺癌細胞；HT-29
形態特性: 上皮樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細胞是1964年由FoghJ用移植培養(yang) 方法和含15%FBS的F12培養(yang) 液從(cong) 原發性腫瘤分離的。近來，已建株的培養(yang) 細胞用含血清的McCoy's5a培養(yang) 基培養(yang) 。該細胞係在裸鼠中成瘤，也能在類固醇處理的地鼠中成瘤。該細胞可合成IgA、CEA、TGFβ結合蛋白和黏液素；表達受體(ti) ，但沒有檢測到血漿酶原活性；不表達CD4，但細胞表麵表達半乳糖神經酰胺（HIV的可能替代受體(ti) ）。該細胞係癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、Myb、sis、fos陽性；p53基因過表達，並且在273位密碼子處發發生G
培養(yang) 條件: DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)5%FBS
傳(chuan) 代方法: 1:3~1：8傳(chuan) 代；每周2~3次換液。
傳(chuan) 代情況: P143
凍存條件: 基礎培養(yang) 基+8%DMSO+20%FBS
支原體(ti) 檢測: 培養(yang) 法（-）
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置於(yu) 4℃ 30~60 分鍾→ （-20 ℃30 分鍾*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chu) 存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置於(yu) 已設定程序之可程序降溫機中每分鍾降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chu) 存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與(yu) 培養(yang) ：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然後用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之後用滴管吹打製成單細胞懸液，自然沉澱並收集上清，用含10% FBS培養(yang) 基終止消化後4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min後，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置，重複此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yang) 基混懸，接種於(yu) 25cm2培養(yang) 瓶，放置於(yu) 37℃ ，5％CO2 培養(yang) 箱中培養(yang) ；
5、差速貼壁1h後，吸出培養(yang) 基，按實驗需要接種於(yu) 6孔板中繼續培養(yang) ；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yang) 基，用溫育的PBS衝(chong) 洗細胞2次，每次10min，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS衝(chong) 洗細胞2次，每次10min，然後在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS衝(chong) 洗細胞2次，每次10min，然後在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS衝(chong) 洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS衝(chong) 洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yang) 液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yang) 液洗滌細胞一次，以去除殘餘(yu) 的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，並且肉眼觀察培養(yang) 器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變
化；或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來，吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yang) 液，吹打下細胞，即可直接用於(yu) 後續實驗。
④如果發現消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發現細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經有部分直接從(cong) 培養(yang) 器皿底部脫落， 直接用細胞培養(yang) 液把細胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉澱細胞，盡量去除細胞消化液後，加入含血清的*培養(yang) 液重新懸浮細胞，即可用於(yu) 後續實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化後可以充分打散組織為(wei) 宜。
小鼠雜交瘤細胞；ZMA1形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 半貼壁生長Anti-AKT1 Polyclonal Antibody
小鼠雜交瘤細胞；16G12形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 半貼壁生長Anti-BTLA Polyclonal Antibody
小鼠雜交瘤細胞；ZMA6形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 半貼壁生長Anti-CENPH Polyclonal Antibody
小鼠雜交瘤細胞；ZMB5形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 半貼壁生長Anti-SIGLEC15 Polyclonal Antibody
小鼠雜交瘤細胞；LCDV-V形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 半貼壁生長Anti-Lamin B1 Monoclonal Antibody
小鼠雜交瘤細胞；WSSV-A形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 半貼壁生長Anti-FLT4 Polyclonal Antibody
小鼠雜交瘤細胞；VEGF形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 半貼壁生長Anti-CASP3 Polyclonal Antibody
L-MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAb2-溴-6-氟甲
L-氨酸MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAb5-吡-2-羧酸
L-Presenilin 1 AntibodyN-基-呱啶酮
L-(標準品)PSD95 (7E3) Mouse mAb5-溴-2-酚
L-β-Tubulin (9F3) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)2-氟-溴吡啶
L-(標準品)β-Tubulin (9F3) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)異
L-(sigma)NUT (C52B1) Rabbit mAb2--5-並噻唑
DL-CD11c (3.9) Mouse mAb (APC Conjuga)2--並噻唑
肌氨酸Ingrin β5 (D24A5) Rabbit mAb1-溴-3,二甲氧基烷
-DL-Ingrin β5 (D24A5) Rabbit mAb2',3'-異叉腺苷
L-亮氨酰RalBP1 (I33) Antibody5-酰基-2-甲基吡啶
蒜氨酸(標準品)Nicastrin Antibody3,二酮
L-ALK (D5F3®) XP® Rabbit mAb環戊
DL-ALK (D5F3®) XP® Rabbit mAb2,5-二氟
L-(標準品) Tuberin/TSC2 (28A7) Rabbit mAb氮雜環丁烷鹽酸鹽
L-Histone H2A (L88A6) Mouse mAb鄰三氟肼
DL-賴氨酸CD14 (61D3) Mouse mAb (APC Conjuga)六水硝酸銩
DL-鹽酸鹽Histone H3 (96C10) Mouse mAb2,二氟
左旋肉；T；Histone H3 (96C10) Mouse mAb(氟甲酰)酸
;左旋肉（標準品）PRC1 Antibody-氟
L-鈉，一水Synaptophysin (D8F6H) XP® Rabbit mAb2,二氟
L-穀氨酰(標準品)Synaptophysin (D8F6H) XP® Rabbit mAb氟-1,2-二
（還原型）Notch Isoform Antibody Sampler Kit1,1,1-三氟-2,戊二酮
L-（標準品）Helioses (D4Z6D) Rabbit mAb2-溴-5-硝基三氟甲
（氧化型）Phospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)
L-高;(S)-2-氨基-羥基丁酸BLNK (D3P2H) XP® Rabbit mAb羥基吡咯並[2,d]嘧啶
DL-異BLNK (D3P2H) XP® Rabbit mAb溴三
L-賴氨酸鹽酸鹽SATB1 (P472) Antibody
L-鹽酸鹽T2 (D6C7K) Rabbit mAb (Mouse Specific)2,4,6-三(2-吡啶基)三
L-天CDC73 (A264) Antibody三基氧翁四氟酸
L-天(標準品)CDC73 (D410) Antibody2-三氟甲基吡啶
L-半胱酸鹽酸鹽無水物SATB1 (L745) Antibody羥基-6-(三氟甲基)嘧啶-2-硫
L-對硝基酰cdc25A Antibody2-硝基咪唑
;S-羧甲基-L-半Akt (pan) (40D4) Mouse mAb (Sepharose® Bead Conjuga)三氟肼
S-苄基-L-半GFAP (GA5) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)(三氟甲基)肼
L-鹽酸鹽GFAP (GA5) Mouse mAb (Alexa Fluor® 555 Conjuga)3',4'-二氟酮
胞樣生長特性: 貼壁生長Anti-CD63 Polyclonal Antibody
結直腸腺癌細胞；HT-29大鼠艾杜糖硫酯酶(IDS)ELISA試劑盒CD30ELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)ELISA試劑盒CD44ELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
大鼠可溶性瘦素受體(ti) (sLR)ELISA試劑盒CD4ELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
大鼠(trypsin)ELISA試劑盒CD6ELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
大鼠複合前列腺特異性抗原(CPSA)ELISA試劑盒CD8ELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
大鼠磷脂酰肌醇抗體(ti) IgG/IgM(PIAb-IgG/IgM)ELISA試劑盒CDK-4ELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
大鼠抗中性粒/中心體(ti) 抗體(ti) (ACA)ELISA試劑盒CDK5ELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
大鼠抗心肌抗體(ti) (AMA)ELISA試劑盒CDl4ELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
