實驗要點及說明：
1．本方法適用於(yu) 貼壁細胞培養(yang) ，而不適用於(yu) 懸浮細胞培養(yang) ，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為(wei) 優(you) 質玻璃，並經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養(yang) 皿，但不宜過大，以避免培養(yang) 液的浪費和增加汙染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鍾並自然晾幹。
公司細胞廣泛用於(yu) 國內(nei) 院校的細胞生物學研究，作為(wei) 實驗項目研究。下列產(chan) 品詳細介紹：
產(chan) 品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
胚胎幹細胞；HES3.1 | 貼壁生長 | EY-X63703 |
細胞名稱 胚胎幹細胞；HES3.1
形態特性: 上皮細胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細胞屬保藏，其特征特性尚未公開。
培養(yang) 條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
傳(chuan) 代方法: 1:3傳(chuan) 代，3-4天傳(chuan) 1次
傳(chuan) 代情況: C5
凍存條件: 基礎培養(yang) 基+8%DMSO+20%FBS
支原體(ti) 檢測: 陰性
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置於(yu) 4℃ 30~60 分鍾→ （-20 ℃30 分鍾*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chu) 存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置於(yu) 已設定程序之可程序降溫機中每分鍾降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chu) 存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與(yu) 培養(yang) ：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然後用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之後用滴管吹打製成單細胞懸液，自然沉澱並收集上清，用含10% FBS培養(yang) 基終止消化後4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min後，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置，重複此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yang) 基混懸，接種於(yu) 25cm2培養(yang) 瓶，放置於(yu) 37℃ ，5％CO2 培養(yang) 箱中培養(yang) ；
5、差速貼壁1h後，吸出培養(yang) 基，按實驗需要接種於(yu) 6孔板中繼續培養(yang) ；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yang) 基，用溫育的PBS衝(chong) 洗細胞2次，每次10min，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS衝(chong) 洗細胞2次，每次10min，然後在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS衝(chong) 洗細胞2次，每次10min，然後在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS衝(chong) 洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS衝(chong) 洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yang) 液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yang) 液洗滌細胞一次，以去除殘餘(yu) 的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，並且肉眼觀察培養(yang) 器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變
化；或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來，吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yang) 液，吹打下細胞，即可直接用於(yu) 後續實驗。
④如果發現消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發現細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經有部分直接從(cong) 培養(yang) 器皿底部脫落， 直接用細胞培養(yang) 液把細胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉澱細胞，盡量去除細胞消化液後，加入含血清的*培養(yang) 液重新懸浮細胞，即可用於(yu) 後續實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化後可以充分打散組織為(wei) 宜。
Koumine
CAS No.：1358-76-5
中文名：鉤吻素子
分子式：C20H22N2O
蘆薈苷 訂購|谘詢 高鐵血紅蛋白還原酶(MHBR) 規格： 20mg
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γCatenin γ連環素/連接蛋白γ抗體(ti) 現貨供應 0.2ml TetrahydroLBiopterin free base
Thrap3/TRAP150 甲狀腺激素受體(ti) 相關(guan) 蛋白3抗體(ti) 現貨供應 0.2ml Tirofiban HCl
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ELL2 聚合酶延伸因子2抗體(ti) 現貨供應 0.2ml Pullulan
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CSTF2T/CstF64 細胞分裂相關(guan) 蛋白CSTF64抗體(ti) 現貨供應 0.2ml Stavudine
OGlAc transferase O位N葡萄糖OGT抗體(ti) 現貨供應 0.2ml Stavudine
SAP62 剪接體(ti) 相關(guan) 蛋白62抗體(ti) 現貨供應 0.2ml Moclobemide
脫氫抗壞血 進口、國產(chan) 英文名稱:Dehydroascorbicacid 含量:CP，98.5%
脫碳秋水仙 進口、國產(chan) 英文名稱:Demecolcine 含量:超純，98%
脫瓜萎鐮菌 進口、國產(chan) 英文名稱:Deoxynivalenol 含量:BR，90%
脫核糖核苷′三 進口、國產(chan) 英文名稱:dNTPs 含量:高純，97%
脫核糖核緩衝(chong) 液 進口、國產(chan) 英文名稱:DNABuffer 含量:高純，98%
脫腺苷單二 進口、國產(chan) 英文名稱:dAMP，2Na 含量:高純，98%
脫腺苷單 進口、國產(chan) 英文名稱:dAMP 含量:超純，98%
脫腺苷三三 進口、國產(chan) 英文名稱:dATP，3Na 含量:BR，98%
脫葉靈 進口、國產(chan) 英文名稱:TDZ 含量:高純，99%
妥布 進口、國產(chan) 英文名稱:Tobramycin 含量:BR，3000u/mg
人胚胎幹細胞；HES3.1麥康凱瓊脂添加劑規格：1ml/支*5用途：每200ml HB0121培養(yang) 基中添加1支(含0.01mg和亞(ya) 碲鉀0.5mg) 配10盒
RS培養(yang) 基規格：100g用途：用於(yu) 致病性嗜水氣單胞菌的選擇性分離培養(yang) （GB標準）
BCYE-Cys瓊脂基礎規格：可溶性焦磷鐵用途：0.025g每支含量
含0.6%酵母浸膏的胰酪腖大豆瓊脂（TSA-YE）顆粒規格：250g用途：用於(yu) 單增李氏菌的分純，培養(yang) ，可用於(yu) 做7%羊血瓊脂
蔗糖胰蛋白腖肉湯規格：250g用途：用於(yu) 致病性嗜水氣單胞菌酶聯免疫試驗
刃天青規格：1g用途：微生物指示劑
