操作流程示意：
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犬雌二醇ELISA檢測試劑盒品牌產(chan) 品別名：犬雌二醇（E2)ELISA檢測試劑盒 價(jia) 格低，質量有保證。產(chan) 品種類多，主要包括：人，大鼠，小鼠，兔，豬，犬，雞，猴，牛，馬，植物等ELISA試劑盒 英文名稱：Canine Estradiol,E2 ELISA Kit  規格： 48T/96T。

組成： 
（1）犬雌二醇ELISA檢測試劑盒品牌結合物及標本的稀釋液；
（2）洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為(wei) 含0.05%吐溫20磷酸緩衝(chong) 鹽水；
（3）酶標記的抗原或抗體(ti) （結合物）；
（4）酶的底物；
（5）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），elisa試劑盒參考標準品和控製血清（定量測定中）；
（6）已包被抗原或抗體(ti) 的固相載體(ti) （免疫吸附劑）
樣本處理及要求：
1. 犬雌二醇ELISA檢測試劑盒品牌血清：室溫血液自然凝固10-20分鍾，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。
仔細收集上清，保存過程中如出現沉澱，應再次離心。
2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為(wei) 抗凝劑，混合10-20分鍾後，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yang) 上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nei) 的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wan) /ml左右。通過反複凍融，以使細胞破壞並放出細胞內(nei) 成份。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本後，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝後一份待檢測，其餘(yu) 冷凍備用。
6. 標本采集後盡早進行提取，提取按相關(guan) 文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放於(yu) -20℃保存，但應避免反複凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑製辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟：
1、犬雌二醇ELISA檢測試劑盒品牌標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，依次進行稀釋數倍。
2、加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘(yu) 各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為(wei) 5倍）。加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3、溫育：用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾。   
4、配液：將30倍（48T 的20 倍）濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用
5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體(ti) ，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍幹。
6、加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 
7、溫育：操作同3。
8、洗滌：操作同5。
9.在確保酶標板底無水滴及孔內(nei) 無氣泡後，立即用酶標儀(yi) 在 450nm 波長測量各孔的光密度 （O.D. 值）。
10、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鍾.
11、終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
12、測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後15分鍾以內(nei) 進行。

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