大鼠原代膀胱平滑肌原代細胞

商品屬性：

細胞基本屬性：

種屬來源：大鼠

組織來源：膀胱膀胱

生長特性：貼壁生長

產(chan) 品規格：5x105cells/T25或1mL凍存管
換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：0.25%胰蛋bai酶

產(chan) 品貨期：6周左右

運輸方式：T25培養(yang) 瓶/ 順豐(feng) 快遞（包郵）

供應限製：僅(jin) 限於(yu) 科學研究，絕不可作為(wei) 動物或人類疾病的治療產(chan) 品使用

背景介紹：:大鼠膀胱平滑肌細胞采用胰蛋bai酶-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法製備而來。大鼠膀胱平滑肌細胞分離自膀胱組織；膀胱是主要由平滑肌細胞組成的中空器官，膀胱平滑肌的舒張和收縮使得膀胱分別儲(chu) 存和排出尿液。膀胱平滑肌細胞表型的調控和可誘導一氧化氮合酶的表達與(yu) 多種病理狀況有關(guan) ，包括膀胱功能障礙。研究表明，組織缺氧抑製膀胱平滑肌細胞的增殖，膀胱平滑肌細胞的分化依賴於(yu) 膀胱上皮細胞釋放的因子。膀胱平滑肌細胞外基質的分泌表型可通過細胞所經曆的機械變形頻率而改變。平滑肌是許多疾病中的共同路徑，因此，了解在疾病發生及持續過程中平滑肌怎樣變化，這是治療方法取得進展的重要一步。膀胱壁由三層組織組成，由內(nei) 而外為(wei) 黏膜層、肌層和外膜。其中，肌層主要由平滑肌構成。膀胱平滑肌細胞原代分離培養(yang) 3天後，可見細胞貼壁伸展，細胞形態大小不一，呈梭形、不規則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周後細胞匯合，多數細胞伸展呈長梭形，胞漿豐(feng) 富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網狀；密度高時，則排列為(wei) 旋渦狀或柵欄狀。傳(chuan) 代後細胞生長較快，4-6天即可匯合，並保持上述形態學特征和生長特點。體(ti) 外培養(yang) 膀胱平滑肌細胞不僅(jin) 為(wei) 組織工程膀胱、尿道提供種植細胞的必要手段，也是研究平滑肌瘤的基礎與(yu) 前提。

細胞培養(yang) 操作：

收貨處理取出T25細胞培養(yang) 瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細胞培養(yang) 箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態

傳(chuan) 代密度細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang)

傳(chuan) 代代數可傳(chuan) 5代左右；3代以內(nei) 狀態

傳(chuan) 代比例傳(chuan) 代建議1：2傳(chuan) 代，1:2傳(chuan) 代就是1個(ge) T25瓶傳(chuan) 2個(ge) T25瓶或者2個(ge) 6cm皿。不是1個(ge) T25瓶傳(chuan) 2個(ge) 10cm皿

傳(chuan) 代方法：

1.吸出T25細胞培養(yang) 瓶中的培養(yang) 基，用PBS清洗細胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yang) 瓶中，輕微轉動培養(yang) 瓶至消化液覆蓋整個(ge) 培養(yang) 瓶底後，吸出多餘(yu) 消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓後，再加入5ml培養(yang) 基終止消化；

3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yang) 瓶傳(chuan) 代，然後補充新鮮的培養(yang) 基至5mL，置於(yu) 37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yang) 箱中靜置培養(yang) ；

4.待細胞貼壁後，培養(yang) 觀察；之後每2-3天換液一次新鮮的培養(yang) 基。

原代細胞培養(yang) 的主要步驟包括：

‌一、剝離組織，去除外膜、結締組織等‌：將組織從(cong) 動物體(ti) 中取出，並去除可能存在的外膜或結締組織等雜質。

二、‌洗滌後將組織剪成1mm左右的小塊‌：使用生理鹽水或其他適當的緩衝(chong) 液洗滌組織，然後將其剪成約1mm大小的小塊。

三、‌用0.1%～0.2%的消化‌：將剪碎的組織塊加入含有0.1%～0.2%的緩衝(chong) 液中，進行消化。消化時間可根據具體(ti) 實驗需求選擇熱消化（37℃）或冷消化（4℃），熱消化時間短，冷消化時間長但條件更溫和。

‌四、吹打分散後，過濾、計數‌：將消化後的細胞吹打到一個(ge) 離心管中，然後過濾、計數。

五、‌按30萬(wan) /毫升分瓶培養(yang) ‌：將計數後的細胞按30萬(wan) /毫升的濃度分瓶培養(yang) 。

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