大鼠原代視網膜色素上皮原代細胞

商品屬性：

細胞基本屬性：

種屬來源：大鼠

組織來源：視網膜視網膜

生長特性：貼壁生長

產(chan) 品規格：5x105cells/T25或1mL凍存管
換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：

產(chan) 品貨期：4周左右

運輸方式：T25培養(yang) 瓶/ 順豐(feng) 快遞（包郵）

供應限製：僅(jin) 限於(yu) 科學研究，絕不可作為(wei) 動物或人類疾病的治療產(chan) 品使用

背景介紹：:大鼠視網膜色素上皮細胞采用胰蛋bai酶-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法，並通過上皮細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基培養(yang) 篩選製備而來。大鼠視網膜色素上皮細胞分離自視網膜組織；視網膜居於(yu) 眼球壁的內(nei) 層，是一層透明的薄膜。視網膜由色素上皮層和視網膜感覺層組成，兩(liang) 層間在病理情況下可分開，稱為(wei) 視網膜脫離。色素上皮層與(yu) 脈絡膜緊密相連，由色素上皮細胞組成，它們(men) 具有支持和營養(yang) 光感受器細胞、遮光、散熱以及再生和修複等作用。組織學上視網膜分為(wei) 10層，由外向內(nei) 分別為(wei) ：色素上皮層、視錐、視杆細胞層、外界膜、外顆粒層、外叢(cong) 狀層、內(nei) 顆粒層、內(nei) 叢(cong) 狀層、神經節細胞層、神經纖維層、內(nei) 界膜。視網膜內(nei) 層為(wei) 襯於(yu) 血管膜內(nei) 麵的一層薄膜，有感光作用；後部鼻側(ce) 有一視神經乳頭。視網膜上的感覺層是由三個(ge) 神經元組成。神經元是視細胞層，專(zhuan) 司感光，它包括錐細胞和杆細胞。視杆細胞主要在離中心凹較遠的視網膜上，而視錐細胞則在中心凹處最多。第二層叫雙節細胞，約有10到數百個(ge) 視細胞通過雙節細胞與(yu) 一個(ge) 神經節細胞相聯係，負責聯絡作用。第三層叫節細胞層，專(zhuan) 管傳(chuan) 導。視網膜是一層菲薄的但又非常複雜的結構，它貼於(yu) 眼球的後壁部，傳(chuan) 遞來自視網膜感受器衝(chong) 動的神經纖維跨越視網膜表麵，經由視神經到達出口。視網膜的分辨力是不均勻的，在黃斑區，其分辨能力。視網膜色素上皮（RPE）位於(yu) 脈絡膜和光感受器細胞外節之間，是視網膜下腔和脈絡膜血管之間的離子、水、營養(yang) 物質和代謝終產(chan) 物轉運通道；主要是由單層色素上皮細胞所構成，排列十分規則。視網膜色素上皮參與(yu) 循環，吞噬脫落的光感受器細胞外節以維持光感受器細胞興(xing) 奮性，並分泌多種生長因子，幫助維持脈絡膜血管內(nei) 皮細胞和光感受器細胞的結構完整性。細胞呈多角形，細胞分為(wei) 三部分，即頂部、體(ti) 部和基底部。視網膜色素上皮細胞無再生能力，細胞死亡後不被替換，而是鄰近的細胞向側(ce) 麵滑動，以填補死亡細胞遺留下來的空間。視網膜色素上皮位於(yu) 脈絡膜和光感受器細胞外節之間，是視網膜下腔和脈絡膜血管之間的離子、水、營養(yang) 物質和代謝終產(chan) 物轉運通道。視網膜色素上皮參與(yu) 循環，吞噬脫落的光感受器細胞外節以維持光感受器細胞興(xing) 奮性，並分泌多種生長因子，幫助維持脈絡膜血管內(nei) 皮細胞和光感受器細胞的結構完整性。

細胞培養(yang) 操作：

收貨處理取出T25細胞培養(yang) 瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細胞培養(yang) 箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態

傳(chuan) 代密度細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang)

傳(chuan) 代代數可傳(chuan) 5代左右；3代以內(nei) 狀態

傳(chuan) 代比例傳(chuan) 代建議1：2傳(chuan) 代，1:2傳(chuan) 代就是1個(ge) T25瓶傳(chuan) 2個(ge) T25瓶或者2個(ge) 6cm皿。不是1個(ge) T25瓶傳(chuan) 2個(ge) 10cm皿

傳(chuan) 代方法：

1.吸出T25細胞培養(yang) 瓶中的培養(yang) 基，用PBS清洗細胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yang) 瓶中，輕微轉動培養(yang) 瓶至消化液覆蓋整個(ge) 培養(yang) 瓶底後，吸出多餘(yu) 消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓後，再加入5ml培養(yang) 基終止消化；

3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yang) 瓶傳(chuan) 代，然後補充新鮮的培養(yang) 基至5mL，置於(yu) 37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yang) 箱中靜置培養(yang) ；

4.待細胞貼壁後，培養(yang) 觀察；之後每2-3天換液一次新鮮的培養(yang) 基。

原代細胞培養(yang) 的主要步驟包括：

‌一、剝離組織，去除外膜、結締組織等‌：將組織從(cong) 動物體(ti) 中取出，並去除可能存在的外膜或結締組織等雜質。

二、‌洗滌後將組織剪成1mm左右的小塊‌：使用生理鹽水或其他適當的緩衝(chong) 液洗滌組織，然後將其剪成約1mm大小的小塊。

三、‌用0.1%～0.2%的消化‌：將剪碎的組織塊加入含有0.1%～0.2%的緩衝(chong) 液中，進行消化。消化時間可根據具體(ti) 實驗需求選擇熱消化（37℃）或冷消化（4℃），熱消化時間短，冷消化時間長但條件更溫和。

‌四、吹打分散後，過濾、計數‌：將消化後的細胞吹打到一個(ge) 離心管中，然後過濾、計數。

五、‌按30萬(wan) /毫升分瓶培養(yang) ‌：將計數後的細胞按30萬(wan) /毫升的濃度分瓶培養(yang) 。

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