小鼠原代Ⅱ型肺泡上皮原代細胞

商品屬性：

細胞基本屬性：

種屬來源：小鼠

組織來源：肺肺

生長特性：貼壁生長

產(chan) 品規格：5x105cells/T25或1mL凍存管
換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：

產(chan) 品貨期：5-6周左右

運輸方式：T25培養(yang) 瓶/ 順豐(feng) 快遞（包郵）

供應限製：僅(jin) 限於(yu) 科學研究，絕不可作為(wei) 動物或人類疾病的治療產(chan) 品使用

背景介紹：:小鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞采用彈性蛋bai酶灌注消化法結合差速貼壁法，並通過上皮細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基培養(yang) 篩選製備而來，小鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞分離自肺組織；肺泡由單層上皮細胞構成的半球狀囊泡。肺中的支氣管經多次反複分枝成無數細支氣管，它們(men) 的末端膨大成囊，囊的四周有很多突出的小囊泡，即為(wei) 肺泡。小肺泡細胞，又稱I型肺泡細胞，厚約0.1微米，基底部是基底膜，無增殖能力。大肺泡細胞，又稱Ⅱ型肺泡細胞，分泌表麵活性物質（二棕櫚酰），以降低肺泡表麵張力。Ⅱ型肺泡細胞位於(yu) Ⅰ型肺泡細胞之間，數量較Ⅰ型肺泡細胞多，但覆蓋麵積比Ⅰ型肺泡細胞小。細胞立方形或圓形,頂端突入肺泡腔。細胞核圓形，胞質著色淺、呈泡沫狀。電鏡下，細胞遊離而有少量微絨毛，胞質內(nei) 富含線粒體(ti) 和溶酶體(ti) ，有較發達的粗麵內(nei) 質網和高爾基複合體(ti) 。核上方有較多的分泌顆粒，電子密度高、大小不等，直徑約0.1-1.0μm顆粒內(nei) 含有平行排列的板層狀結構，稱為(wei) 嗜餓性板層小體(ti) 。小體(ti) 內(nei) 的主要成分為(wei) 磷脂，以二棕櫚酰為(wei) 主，此外還有糖胺多糖及蛋白質等。顆粒內(nei) 物質釋放出來後，在肺泡表麵形成一層粘液層，稱為(wei) 表麵活性物質（surfactant）。表麵活性物質有降低肺泡表麵張力、穩定肺泡大小的作用。呼氣時肺泡縮小，表麵活性物質密度增加，表麵張力降低，防止肺泡過度塌陷；吸氣時肺泡擴張，表麵活性物質密度減小，肺泡回縮力加大，可防止肺泡過度膨脹。表麵活性物質的缺乏或變性均可引起肺不張，過度通氣可造成表麵活性物質缺乏；吸入毒氣可直接破壞表麵活性物質。Ⅱ型肺泡細胞有分裂、增殖並分化為(wei) Ⅰ型肺泡細胞的潛能，故具有修複受損傷(shang) 上皮的作用。

細胞培養(yang) 操作：

收貨處理取出T25細胞培養(yang) 瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細胞培養(yang) 箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態

傳(chuan) 代密度細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang)

傳(chuan) 代代數可傳(chuan) 5代左右；3代以內(nei) 狀態

傳(chuan) 代比例傳(chuan) 代建議1：2傳(chuan) 代，1:2傳(chuan) 代就是1個(ge) T25瓶傳(chuan) 2個(ge) T25瓶或者2個(ge) 6cm皿。不是1個(ge) T25瓶傳(chuan) 2個(ge) 10cm皿

傳(chuan) 代方法：

1.吸出T25細胞培養(yang) 瓶中的培養(yang) 基，用PBS清洗細胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yang) 瓶中，輕微轉動培養(yang) 瓶至消化液覆蓋整個(ge) 培養(yang) 瓶底後，吸出多餘(yu) 消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓後，再加入5ml培養(yang) 基終止消化；

3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yang) 瓶傳(chuan) 代，然後補充新鮮的培養(yang) 基至5mL，置於(yu) 37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yang) 箱中靜置培養(yang) ；

4.待細胞貼壁後，培養(yang) 觀察；之後每2-3天換液一次新鮮的培養(yang) 基。

原代細胞培養(yang) 的主要步驟包括：

‌一、剝離組織，去除外膜、結締組織等‌：將組織從(cong) 動物體(ti) 中取出，並去除可能存在的外膜或結締組織等雜質。

二、‌洗滌後將組織剪成1mm左右的小塊‌：使用生理鹽水或其他適當的緩衝(chong) 液洗滌組織，然後將其剪成約1mm大小的小塊。

三、‌用0.1%～0.2%的消化‌：將剪碎的組織塊加入含有0.1%～0.2%的緩衝(chong) 液中，進行消化。消化時間可根據具體(ti) 實驗需求選擇熱消化（37℃）或冷消化（4℃），熱消化時間短，冷消化時間長但條件更溫和。

‌四、吹打分散後，過濾、計數‌：將消化後的細胞吹打到一個(ge) 離心管中，然後過濾、計數。

五、‌按30萬(wan) /毫升分瓶培養(yang) ‌：將計數後的細胞按30萬(wan) /毫升的濃度分瓶培養(yang) 。

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